招聘信息

新聞中心

當前位置:首頁>新聞中心 > 公司動態 >
? 
點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

細胞器間的互作也是個有意思的東西,我們之前分享過脂滴LD和過氧化物酶體的文章,還分別整理分享過線粒體、內體的故事,這次整理分享一篇算是內體和線粒體互作的文章把,具體內容如下:

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

MCF-7細胞誘導凋亡后,細胞色素C從線粒體釋放,內溶酶體(Rab5標記,我們之前分享的內體相關文章把Rab5歸為早期內體marker)定位到線粒體(TOM70標記)

  

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

HeLa細胞上,凋亡發生時也觀察到了內溶酶體定位到外膜損傷的線粒體(這回沒有細胞色素C,用了IMS-RP – 綠色本來在線粒體內,和線粒體(白色)共定位,發生凋亡后綠色彌散到整個細胞)

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

看內溶酶體和線粒體空間關系細節:凋亡發生后內溶酶體定位到了線粒體內部,還發現內溶酶體和BAX接近(凋亡發生時BAX在線粒體上組裝出孔洞結構)

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

內溶酶體在線粒體內部,這個現象挺有意思,用電鏡字再確證一下:凋亡發生時,線粒體內部的確出現了空泡,;免疫金法確證凋亡發生時內溶酶體在線粒體內部

  

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

空間上看了凋亡過程中內溶酶體的分布,開始看看時間上內溶酶體在整個凋亡過程中的位置,發現:內溶酶體定位到線粒體發生在凋亡早期,它定位到內溶酶體之后線粒體外膜才發生損傷,而后線粒體形態改變(之前分享的那篇關于BAX/BAK的science里也觀察到了凋亡發生后線粒體形態發生改變)

  

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

BID是另一個線粒體外膜損傷marker,又分別用Tf-546和Bodipy-CHOL標記內溶酶體,看到了內溶酶體進入線粒體的過程

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

內溶酶體可以被膽固醇染料Bodipy-CHOL標記,而線粒體外膜不含膽固醇,所以作者推測凋亡過程中內溶酶體定位到線粒體會改變線粒體膜成分,實際驗證一下:未誘導凋亡的細胞用皂苷(膽固醇選擇性透化劑)透化后,染線粒體外膜蛋白TOM20和線粒體內的一種蛋白TRAP1,無法染色線粒體內蛋白TRAP1;而誘導凋亡后,只有經過皂苷透化的細胞可實現TRAP1染色(PFA固定的凋亡細胞沒法實現TRAP1染色,排除了凋亡細胞是因為BAX/BAK組裝出的孔洞造成TRAP1染色的可能性),暗示凋亡后線粒體那有了皂苷可透化的膽固醇成分,應該是內溶酶體把膽固醇帶過去改變了線粒體膜成分

  

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

看看內溶酶體定位和凋亡關鍵分子事件(BAX聚集、細胞色素C釋放)的關系

 

 內溶酶體和線粒體、凋亡關鍵分子事件的時空關系看完差不多了,開始看它在凋亡中的作用,沉默Rab5后,凋亡過程中定位到線粒體的BAX增加

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

沉默Rab5后,凋亡細胞線粒體細胞色素C釋放減少

 

 HeLa細胞上也發現當Rab5被沉默后,凋亡細胞線粒體BAX聚集增加、細胞色素C釋放減少

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

沉默Rab5的細胞在表達Rab5可rescue細胞色素C釋放,但過表達Rab5并不能促進細胞色素C的釋放

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 做的還挺細,除了看凋亡過程中線粒體細胞色素C的釋放,還看了smac的釋放,沉默Rab5后,smac釋放也受到影響

 

 

文章到這剛兩層,繼續往內溶酶體的上游挖,作者發現是去泛素化酶USP15調節內溶酶體定位到凋亡細胞的線粒體

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

沉默USP15抑制內溶酶體定位到凋亡細胞線粒體后,凋亡細胞線粒體細胞色素C釋放減少 

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

沉默USP15抑制內溶酶體定位到凋亡細胞線粒體后,BAX定位到凋亡細胞線粒體增加

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

剛才是HeLa上沉默USP15,在MCF-7上再做一遍:沉默USP15后,內溶酶體定位到線粒體減少、細胞色素C釋放減少

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

沉默USP15后線粒體外膜仍會損傷,但耗時變長

 

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

接著挖調控Rab5的蛋白豐富文章:這回找的是調節Rab活性的GEF(GTP exchange factor),先看ALS2,將其沉默,發現并不影響Rab5定位到凋亡細胞線粒體、影響BAX、細胞色素C行為

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

另一個GEF Rabex-5在誘導凋亡后會定位到線粒體

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 沉默Rabex-5影響內溶酶體、BAX、細胞色素C行為 – 又找到一個調控內溶酶體的蛋白

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

接著描摹內溶酶體對凋亡調控的細節(同時也豐富文章):凋亡發生后BAX構象發生改變,N端會暴露,二聚之后寡聚,沉默一系列內溶酶體蛋白后,凋亡細胞BAX N端暴露減少、BAX寡聚減少,暗示內溶酶體調節BAX構象

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

 凋亡過程中,BAX通過在線粒體表面組裝出孔洞結構調節線粒體通透性,組裝行為依賴BAX構象變化、寡聚,既然內溶酶體影響BAX N端暴露和寡聚,那么它很可能影響線粒體通透性,還是通過染線粒體內蛋白TRAP1看內溶酶對線粒體通透性的影響,發現:沉默前面挖到的一系列內溶酶體調控蛋白后,TRAP1染色受抑制,暗示內溶酶體調控線粒體通透性(還看到了沉默內溶酶體后細胞死亡減少)

 

點擊添加圖片描述(最多60個字)編輯

 

最后又換了比較新型的凋亡誘導劑(Vx是BCL-2抑制劑,S63845是MCL-1抑制劑)看文章挖出來的內溶酶體在凋亡過程中的行為

 

細胞器間互作是個有意思的東西,有點跨界的意思 - 找到一個點(這篇是內溶酶體),和經典通路(內源凋亡通路)建立關聯就成文了。可以參考這個思路,看看自己關注的細胞器能不能和別人的方向發生點故事,讀讀文線,把兩條技術路線交叉一下就OK了……

 

Tim Sen Wang, Isabelle Coppens, Anna Saorin, Nathan Ryan Brady, Anne Hamacher-Brady. Endolysosomal Targeting of Mitochondria Is Integral to BAX-Mediated Mitochondrial Permeabilization during Apoptosis Signaling [J]. Developmental Cell, June 22, 2020.

友情鏈接:

Copyright ? 1997-2009 Beijing Dequan Xingye Commerce and Trade Co,.LTD , All Rights Reserved  

北京網站設計信達互聯